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BIM试剂盒:
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一、产品资料
产品名称:BK通道蛋白抗体
产品类型:一抗
产品规格:0.2ml/0.1ml
产品应用:科研
产品商标:Abcam
作用:指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。产品低温保存。
抗体来源:详询种属
适应物种:可提供抗体的各种标记
产品价格:优惠价格来电咨询
详细资料:参考产品详询说明
产品简介:
抗体:是高等动物在抗原物质的刺激下由浆细胞产生的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体通常存在于血清和淋巴(组织液)中。
单克隆及多克隆抗体:由单一克隆的细胞(通常是单一克隆的杂交瘤细胞)所产生的识别某一抗原表位的单一抗体;多克隆抗体是由多种细胞分别接触相应抗原而产生的多种抗体的总和,多克隆抗体识别抗原的多个表位。
抗体结构:抗体是由四条肽链构成的“Y”形对称的分子,包括两条重链和两条轻链。在“Y”的尖端部位的氨基酸顺序在不同的抗体分子中差别很大,是负责与抗原进行特异性结合的区域,称为可变区,余下的区域则称为恒定区。
二、抗体分类
抗体分类:根据重链恒定区的血清学类型,可将抗体分为IgM,IgG,IgA,IgD,IgE五类,它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。在上述每一类别中,按重链构造上的变异又可分为几个亚类,例如人的IgG可分为IgG1,IgG2,IgG3,IgG4四个亚类。
轻链分为两种类型,kappa链和lambda链,但每种抗体中只存在一种类型的轻链。
二抗:二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体,上面通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛,如western blot(通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质),ELISA(以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质,尤其是相应的抗原或抗体),免疫组织化学(检测组织中的特异性抗原),免疫细胞化学(通过免疫学方法检测细胞的抗原组成),流式细胞术(通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞)及免疫沉淀(通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原)。二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体均具有特异性,因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,大大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号大大增强,提高了实验灵敏度。
三、操作流程
染色质免疫沉淀的流程示意图
染色质免疫沉淀
染色质免疫沉淀(CHIP)最初是在20世纪80年代研究RNA聚合酶II与靶基因相互作用的过程中发展起来的 [1] 。在此过程中,细胞被固定在甲醛或类似的固定剂中以使细胞DNA和相关蛋白分子发生交联。固定的细胞随后经超声处理,使细胞中的DNA-蛋白质复合物断裂为100-300 bp的片段,然后用结合在DNA上的特异性蛋白(如组蛋白和转录因子)的抗体,按照标准方法免疫沉淀相关的DNA片段。最后,通过去交联分离DNA-蛋白复合物,再行PCR分析结合在蛋白上的DNA片段。理想情况下,标准的CHIP法是用来验证某个蛋白和某个假定的靶基因之间的相互作用,因为要根据假定的靶基因序列设计特异性PCR引物(图7)。
CHIP法有个局限性,即交联步骤可能会破坏蛋白分子结构,从而阻碍抗体与其结合,影响后续的免疫沉淀。此时,可以尝试无交联步骤的CHIP法;此过程称为N-ChIP的免疫沉淀法 [1, 2] 。尽管去交联提高抗原识别能力,但是一般只适用于目标蛋白强烈地结合在DNA上这种情况。
最近,芯片被改良以用于高通量分析。例如,ChIP-on-Chip结合了CHIP法和微阵列技术,适用于荧光标记序列的全基因组筛选。在这些检测中,用不同的荧光染料标记沉淀组DNA和对照组DNA(通常不经沉淀的总输入),然后用各组DNA与DNA微阵列芯片甚至整个基因组小寡核苷酸进行杂交。通过标准化分析技术,可以从芯片获得CHIP样品相对于DNA对照组的DNA结合位点的详细信息。
染色质免疫共沉淀测序
将染色质沉淀技术与现代高通量测序技术相结合,从而有利于鉴定前所未知的靶基因序列。由于高通量测序可以鉴定和提供大量的基因组信息,因此染色质免疫共沉淀测序适用于整个基因组的染色质免疫沉淀检测 [3] 。
类似于染色质免疫沉淀技术用来分析DNA-蛋白质的相互作用,交联免疫沉淀技术可用于分析RNA-蛋白质的相互作用[4] 。染色质免疫共沉淀测序的方法的类似于染色质免疫沉淀;然而,因为目标核酸不同,因此也存在几个明显的差异。在染色质免疫共沉淀测序中,推荐使用的交联剂是紫外线照射。由于转录组RNA一般较短,所以不需要经过超声处理,细胞可以在标准缓冲液中裂解。但是必须在所有的裂解产物中添加RNase抑制剂以防止目标RNA的降解 [5]。
四、储存方式
保存条件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.